德國 NanoTemper 公司于2010年推出的Monolith系列微量熱泳動儀,提供了一種簡捷、快速分析生物分子相互作用的方法。Monolith系列微量熱泳動儀,可在溶液中測定生物分子間相互作用,小到離子,大到病毒顆粒,10分鐘即可獲得親和力數據。已有600家高校、科研機構和企業使用Monolith系列微量熱泳動儀進行生物分子相互作用研究,發表文獻超過2000篇。
微量熱泳動(MST)分子相互作用分析儀?:
- 迅速獲得試驗結果:10 分鐘之內完成親和力測定;
適用于所有類型樣品:不受樣品大小和分子量限制;
樣品準備簡單:溶液中直接測定,無需表面固定;
樣品用量極少:測定Kd值僅需要數ng樣品;
無需蛋白純化:熒光融合蛋白可無需純化,直接在裂解液中進行試驗;
試驗優化方便:數據直接體現樣品性質;
微量熱泳動(MST)分子相互作用分析儀? Monolith NT.115主要參數:
- 可測定樣品類型:離子、化合物、核酸、多肽、蛋白、糖類、脂質體、納米顆粒、病毒等;
- 測定親和力(KD值)范圍:1 pM – mM;
- 測定樣品的分子量范圍:101 - 107 Da;
- 獲得親和力所需要的蛋白樣品量小于0.5 μg;
- 一次可測定的樣品數量:16個;
- 每個樣品所需體積:4 μL;
- 獲得親和力所需要的測定時間:10 min;
- 對測定緩沖液沒有限制,包括但不限于含去垢劑的緩沖液、含DMSO(0-100%)等有機溶劑的緩沖液、細胞裂解液、上清液、血清、血漿、組織勻漿等。
- 除測定親和力外,還可測定化學計量數,即生物分子結合位點的數目;熱力學參數:ΔG (自由能 )、ΔH (焓)、ΔS (熵);進行競爭性試驗,獲得Ki;區分多次結合,分別計算多個結合位點的親和力;測定蛋白寡聚化的親和力和動力學;
- 儀器無需預熱可直接開機使用,實驗完成后不需要對儀器進行清洗維護;
檢測原理:
微量熱泳動(MST) 是一種定量分析生物分子間相互作用的有效方法。它檢測分子在微觀溫度梯度場中的運動,探測其水化層、電荷以及分子大小的變化。MST將熒光檢測與熱泳動的靈活性及靈敏度結合起來,快速、可信地檢測分子間相互作用。MST 測試時,由紅外激光建立微觀溫度梯度場,通過熒光染料標記、熒光融合蛋白、色氨酸自發熒光等信號追蹤,分子在微觀溫度梯度場中的定向移動就可以被探測和量化。
參考文獻:
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Science : "Precursor processing for plant peptide hormone maturation by subtilisin-like serine proteinases." Katharina S., et al. Science 2016, 354, 1594-1597
Science : "Competition between MPS1 and microtubules at kinetochores regulates spindle checkpoint signaling." Yoshitaka H., et al. Science 2015, 348, 1264-1267
Nature : “Molecular basis of nitrate uptake by the plant nitrate transporter NRT1.1.”Parker and Newstead, Nature, 2014, 507, 68-72
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